一提到ELISA，各位做科研的小伙伴都很熟悉，不就是簡(jiǎn)單的抗原抗體反應(yīng)嘛？但這“簡(jiǎn)單的免疫反應(yīng)"，往往在實(shí)際操作中一個(gè)不小心，結(jié)果就會(huì)相差甚遠(yuǎn)，甚至功虧一簣，假陽(yáng)性或者假陰性會(huì)讓人焦頭爛額，那么，到底要怎樣快速有效的得到可靠的ELISA結(jié)果呢？

今天小編給大家?guī)?lái)的是一家位于德國(guó)的專業(yè)生產(chǎn)免疫優(yōu)化試劑的公司-——candor bioscience，它專注于ELISA各個(gè)環(huán)節(jié)中的試劑，為廣大研究者提供超過(guò)50種不同類型的產(chǎn)品，包括優(yōu)化試劑，封閉試劑，穩(wěn)定劑和免疫實(shí)驗(yàn)緩沖液。通過(guò)使用這些試劑，可以幫助您提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性，簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)步驟，減少實(shí)驗(yàn)時(shí)間。

接下來(lái)，小編將通過(guò)Sandwich-ELISA的實(shí)驗(yàn)過(guò)程像大家展示candor bioscience優(yōu)質(zhì)ELISA產(chǎn)品在實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用。

第一步，抗體的包被：

用Coating Buffer 1x（貨號(hào)120/121）將抗體稀釋至0.1 - 10 µg/mL。在酶標(biāo)板反應(yīng)孔中加100-150 µL包被好的抗體，4℃孵育過(guò)夜或室溫孵育1-4 h。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用Washing Buffer 1x （Washing Buffer 10x TRIS, 貨號(hào)145）洗板3 -5次，每次3 min。

第二步，封閉與穩(wěn)定：

用表面封閉劑來(lái)充填空隙，從而排除ELISA后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附。推薦使用的表面封閉劑如The Blocking Solution（貨號(hào)110），SmartBlock™（貨號(hào)113），BSA-Block（貨號(hào)115）。每個(gè)空中加入200 µl的表面封閉劑，室溫孵育1-2 h后，棄去孔內(nèi)溶液，用Washing Buffer 1x （Washing Buffer 10x TRIS, 貨號(hào)145）洗板3 -5次，每次3 min。

如果想保持ELISA板包被狀態(tài)的長(zhǎng)期穩(wěn)定，這個(gè)步驟就是必選的。可以選用Liquid Plate Sealer®（貨號(hào)160）進(jìn)行ELISA板的穩(wěn)定，向每個(gè)孔中加入200 µl的Liquid Plate Sealer®，室溫孵育15-90 min，棄去孔內(nèi)溶液，在37-45 ℃條件下干燥1-2 h，這樣處理后的板子放在密封袋中，在干燥、2-8 ℃的環(huán)境中保存1-3 年的時(shí)間。

第三步，添加樣品或校準(zhǔn)液(雙重測(cè)量)：

在孔中加入100-150 µL用樣品稀釋液稀釋后的樣品以及標(biāo)準(zhǔn)液，室溫孵育30 min，棄去孔內(nèi)溶液，用Washing Buffer 1x （Washing Buffer 10x TRIS, 貨號(hào)145）洗板3 -5次，每次3 min。

推薦使用candor bioscience優(yōu)質(zhì)buffer：

1. LowCross-Buffer®（貨號(hào)100），有助于減少交叉反應(yīng)、基質(zhì)效應(yīng)和非特異性結(jié)合等干擾。將干擾降到zui低，提升了分析的質(zhì)量與結(jié)果的可靠性。

2. Sample Buffer（貨號(hào)105），適合在無(wú)干擾的情況下使用。

3. Antibody Stabilizer（貨號(hào)130/131），可以在2-8°C下長(zhǎng)期儲(chǔ)存蛋白質(zhì)或抗體的穩(wěn)定劑

第四步，加入標(biāo)記抗體并檢測(cè)：

向每個(gè)孔中加入100-150 µl的標(biāo)記抗體(HRP，辣根過(guò)氧化物酶;AP、堿性磷酸酶等)，室溫孵育2-4 h，棄去孔內(nèi)溶液，用Washing Buffer 1x （Washing Buffer 10x TRIS, 貨號(hào)145）洗板3 -5次，每次3 min，進(jìn)行底物檢測(cè)(如過(guò)氧化物酶的TMB)。

推薦使用candor bioscience優(yōu)質(zhì)buffer：

1.HRP-Protector™（貨號(hào)222）, 用于在2-8℃長(zhǎng)期保存HRP-結(jié)合物。

2. AP-Protector®（貨號(hào)235），用于2-8℃長(zhǎng)期保存AP-結(jié)合物，還可直接用于AP偶聯(lián)物的培養(yǎng)。

3. LowCross® HRP-Stab（貨號(hào)270），用于在2-8℃長(zhǎng)期保存HRP結(jié)合物，可以最大限度地減少非特異性結(jié)合、交叉反應(yīng)和基質(zhì)效應(yīng)，中和干擾（包括 HAMA 的衍生干擾）。

4. LowCross-Buffer®（貨號(hào)100），有助于減少交叉反應(yīng)、基質(zhì)效應(yīng)和非特異性結(jié)合等干擾。將干擾降到zui低，提升了分析的質(zhì)量與結(jié)果的可靠性。

5. Sample Buffer（貨號(hào)105），適合在無(wú)干擾的情況下使用。

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