細(xì)胞傳代的培養(yǎng)技巧

　　細(xì)胞培養(yǎng)是指從體內(nèi)組織取出細(xì)胞在體外模擬體內(nèi)環(huán)境下，在無(wú)菌、適溫和豐富的營(yíng)養(yǎng)條件下，使其生長(zhǎng)繁殖，并維持其結(jié)構(gòu)和功能的一種培養(yǎng)技術(shù)。那么你知道細(xì)胞傳代的培養(yǎng)技巧有什么嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！

　　一、選擇適合的細(xì)胞培養(yǎng)基：

　　合適的細(xì)胞培養(yǎng)基是體外細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的重要條件之一，培養(yǎng)基不僅提供細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)和促使細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的基礎(chǔ)物質(zhì)，而且還提供培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖的生存環(huán)境。

　　二、根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)方式不同又分為貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞：

　　貼壁細(xì)胞：必須貼附于支持物表面才能生長(zhǎng)，見于各種實(shí)體瘤細(xì)胞；

　　懸浮細(xì)胞：于懸浮狀態(tài)下即可生長(zhǎng)，不需要貼附于支持物表面，見于各種造血系統(tǒng)腫瘤細(xì)胞。

　　正常細(xì)胞形態(tài)較好，輪廓清晰，邊緣透亮，細(xì)胞增殖狀況良好。當(dāng)貼壁細(xì)胞長(zhǎng)到密度90%時(shí)，需進(jìn)行傳代。

　　貼壁細(xì)胞傳代：

　　丟掉原有的培養(yǎng)基加入復(fù)溫的PBS潤(rùn)洗兩次，吸掉PBS，加入胰酶消化細(xì)胞，顯微鏡下觀察，待細(xì)胞變圓，細(xì)胞間隙明顯，部分細(xì)胞剛開始漂浮的時(shí)候加入培養(yǎng)基，然后將細(xì)胞小心吹打下來(lái)，1000rpm/min室溫離心5min，棄上清，細(xì)胞沉淀用培養(yǎng)基重懸，按合適的密度分到幾個(gè)培養(yǎng)瓶中進(jìn)行下一輪培養(yǎng)。

　　對(duì)于較難消化的細(xì)胞，可以用2%利多卡yin消化5-8分鐘，然后再棄去，加培養(yǎng)基吹打也可以，對(duì)細(xì)胞的影響不大。

　　懸浮細(xì)胞傳代：

　　懸浮細(xì)胞傳代比貼壁細(xì)胞傳代操作步驟較簡(jiǎn)單。因?yàn)榧?xì)胞已經(jīng)懸浮在生長(zhǎng)培養(yǎng)基中，所以無(wú)需進(jìn)行酶處理即可將其從培養(yǎng)容器中取出，整個(gè)過(guò)程更快，對(duì)細(xì)胞的損傷更小。懸浮細(xì)胞多采用離心法傳代，細(xì)胞離心后去掉上層清液，沉淀細(xì)胞加新培養(yǎng)液后吹打混勻傳代。也可以直接稀釋培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞并使其繼續(xù)擴(kuò)增，或通過(guò)從培養(yǎng)瓶中取出一部分細(xì)胞并將剩余細(xì)胞稀釋至適合細(xì)胞系的接種密度。

　　一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中，稀釋細(xì)胞濃度即可，若培養(yǎng)液太多時(shí)，將細(xì)胞懸液移入離心管中，1000 rpm/min室溫離心5 min。棄上清，細(xì)胞沉淀用w全培養(yǎng)液重懸，按要求分瓶(視細(xì)胞密度而定1:4-1:8)，每T25瓶加w全培養(yǎng)液至4-5 ml，37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)。有些懸浮細(xì)胞趨于成團(tuán)生長(zhǎng)，此時(shí)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好，當(dāng)補(bǔ)液時(shí)，需避免反復(fù)吹打。

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